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采用密度梯度離心法分離臍血干細胞

第一、利用 3 種質(zhì)量濃度的聚蔗糖泛影葡胺分離液分離臍血單個核細胞，用細胞計數(shù)法、活細胞染色法及流式細胞計數(shù)儀分析單個核細胞的表面標志，以探討密度梯度離心法分離人臍血干細胞分離介質(zhì)的最佳濃度，建立臨床級干細胞分離應(yīng)用方案，使用的離心機設(shè)備為冷凍低速離心機。

第二、臍血由于其來源容易，所含細胞種類和數(shù)量比較多，比骨髓和外周血中的細胞更為原始，且其臨床應(yīng)用不涉及社會、倫理、法律方面的限制等優(yōu)勢。臍血間充質(zhì)干細胞可以分化為成骨、軟骨、脂肪細胞等，內(nèi)皮干/祖細胞治療缺血性疾病，已經(jīng)在臨床有突出的療效。

國內(nèi)、外分離臍血干細胞方法常采用磁珠/流式細胞分選法、臍血庫儀器/羥乙基淀粉沉淀法和密度梯度離心法。由于目的不同，各類方法有其自身特點

第三、臍血庫分離干細胞常用羥乙基淀粉沉淀和儀器離心分離法，分離的細胞量大、成分較多但混有大量紅細胞，適合用作大量分離、儲存干細胞。密度梯度離心法多采用Percoll、Ficoll分離液分離細胞，得到單個核細胞群，該細胞群成分復(fù)雜，純度不高。但密度梯度離心法分離臍血單個核細胞由于細胞得率高、方法簡單等突出優(yōu)點，有望成為制備臨床級干細胞的優(yōu)選方法，分離介質(zhì)以聚蔗糖泛影葡胺最為常用。

第四、應(yīng)用臍血分離干細胞的目的是獲得以干細胞(間充質(zhì)干細胞、造血干細胞)為主要群體的單個核細胞群。用聚蔗糖泛影葡胺為分離介質(zhì)研究何種密度狀態(tài)下獲得的干細胞最多，目前尚未深入研究。文章在前期工作基礎(chǔ)上，探索密度梯度離心法用3種不同質(zhì)量濃度分離液分離臍血單個核細胞，比較分離單個核細胞不同亞群的比例和純度，試圖找出用密度梯度離心法獲得干細胞比例和純度較高的分離介質(zhì)。